Hibridación fluorescente in situ en carcinoma uroterial

La hibridación fluorescente in situ (FISH) se utilizó para detectar alteraciones cromosómicas en células uroteliales. En especifico las aneuploidías en los cromosomas (cr) 3,7,17 y para la pérdida del locus 9p21.  Se utilizo sondas específicas marcadas con fluorocromos  (secuencias de ADN complementario) y se hibridaron con muestras de células uroteliales fijadas y mediante la emisión de señales fluorescentes se puedo observar y analizar las muestras por medio  del microscopio de fluorescencia. 

Disponible en: 

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0210480612003889?via%3Dihub

Referencias bibliográficas 

1. García-Peláez B, Trias I, Román R, Pubill C, Banús JM, Puig X. La hibridación in situ fluorescente en la predicción de recurrencia del carcinoma urotelial. Actas Urol Esp [Internet]. 2013 [citado el 22 de junio del 2024];37(7):395–400. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.acuro.2012.11.005. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0210480612003889?via%3Dihub

RT-PCR en tiempo real para el genotipado de rotavirus

Tema: Ensayo de RT-PCR en tiempo real para genotipado de rotavirus

Objetivo: Evaluar la eficacia de la PCR en tiempo real como una herramienta de diagnóstico para la detección y genotipado de cepas de rotavirus en muestra de heces de pacientes con gastroenteritis aguda.

Muestra biológica: Heces  (niños de 5 años o menos con un diagnóstico primario de gastroenteritis aguda no sanguinolenta) 

Tipo de ácido nucleico: ARN de rotavirus

Extracción de ácido nucleico:  Las muestras de heces primero  fueron almacenadas a -70°C después del análisis primario y se preparó una suspensión  de peso por volumen (p/v). Se disolvió un gramo o 100 µl de cada muestra de heces en 1000  µl de Buffer Salino Fosfato (PBS), la muestra se centrifugó a 1500 xg durante 20 minutos. Se extrajo el ARN de rotavirus  de 10µl  del sobrenadante filtrado mediante el método  estándar con fenol-cloroformo.  Luego se realizo la transcripción inversa para poder sintetizar el ADN complementario utilizando el kit de transcripción  inversa RevertAid RT.

Gen o secuencia a amplificar:  Del gen VP7 se amplifico los genotipos  (G1, G2, G9)  y del gen  VP4 se  amplifico los genotipos (P4 y P8).

Imagen obtenida de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7601544/

Tipo de PCR:  PCR en tiempo real TaqMan y PCR multiplex semianidada

Pasos: 

      1.    Pre-ciclo: 95°C durante 5 minutos

      2.    40 ciclos de amplificación: 

             a) Desnaturalización: 94°C durante 1 minuto

             b) Alineación: 55°C durante 1 minuto

             c)Extensión: 72 °C durante 1 minuto

     3.     Elongación final: 72°C durante 10 minutos

Visualización: Fueron analizados en gel de agarosa al 2% y visualizados utilizando GelRed (tinte ocupado para tinción de ácidos nucleicos) permite determinar  presencia, tamaño y cantidad de los fragmentos amplificados. Los fragmentos de ADN amplificados se separan  por tamaño en el gel de agarosa mediante electroforesis.

Imagen obtenida de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7601544/

Referencias Bibliográficas: 

1. Mousavi-Nasab SD, Sabahi F, Kaghazian H, Paryan M, Mirab Samiee S, Ghaderi M, et al.   Un ensayo de RT-PCR en tiempo real para el genotipado de rotavirus. Irán Biomed J [Internet]. 2020 [citado el 14 de junio de 2024];24(6):394–9. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7601544/

Alteraciones de la epigénetica en la obesidad

La deficiencia de SETD2 ocasiona la disminución H3K36me3 metiltransferasa que puede sufrir una modificación epigénetica y por tanto contribuir al silenciamiento de genes, afectando la regulación de la homeostasis del colesterol y evitando la activación de la proteína Jun/activadora 1(AP-1)  por la acumulación excesiva de lípidos. Y por consecuencia de la deficiencia de H3K36m3 contribuye a la obesidad de diversas manera como alteraciones en el metabolismo, aumento del apetito y acumulación de grasa corporal. 

Imagen obtenida de: http://dx.doi.org/10.1002/mco2.496

    Referencias Bibliográficas:

1.  Long Y, Mao C, Liu S, Tao Y, Xiao D. Modificaciones epigenéticas en enfermedades asociadas a la obesidad. MedComm [Internet]. 2024 [citado el 8 de junio del 2024];5(2). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1002/mco2.496

Alteraciones en la traducción en la insuficiencia cardiaca

                   

La proteína 1 de unión a la caja Y (Ybx1) regula la traducción de ARNm dependiendo de sus concentración influye en la estabilidad, procesamiento y traducción de proteínas. El Ybx1 es considerado una proteína de unión a ARN (RBP) el cual es indispensable para controlar la expresión genética y la función cardiaca en la insuficiencia cardiaca  después de haber recibido una señal patológica  de mTORC1.  Además el agotamiento de Ybx1 se ve relacionado con la reducción en el crecimiento y proliferación celular de los cardiomiocitos.

Imagen obtenida de: https://www.lapalabrabierta.com/2022/04/03/insuficiencia-cardiaca-la-pandemia-silente/

Referencias Bibliográficas

1. Varma E, Burghaus J, Schwarzl T, Sekaran T, Gupta P, Górska AA, et al. El control traslacional de la expresión de Ybx1 regula la función cardíaca en respuesta a la sobrecarga de presión in vivo. Básico Res Cardiol [Internet]. 2023 [citado el 1 de junio de 2024];118(1). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1007/s00395-023-00996-1